直播回放及常见问答|解码动物外泌体：从基础科研到转化应用突破

最佳方法取决于实验目的、生物样本类型和实验条件。通常，差速离心是最常用的方法，但免疫磁珠分离和超滤法可以提高纯度。具体而言，差速离心适用于大量样本的初步分离，而免疫磁珠分离和超滤法更适用于特异性和高纯度的外泌体分离。

超速离心法是最常用的外泌体纯化手段，采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。本实验室通过超速离心法提取植物外泌体，有的外泌体粒径大小在200nm左右，提取的浓度在正常范围内。一般在样本前处理步骤最后一步经0.22微米滤膜过滤，除去较大的囊泡，再进行超离即可。或者可以选用试剂盒或者尺寸排阻方法提取外泌体。

透射电子显微镜可以显示外泌体的形态和尺寸，验证其完整性。纳米粒子跟踪分析可提供外泌体的粒径分布和浓度信息。通过WB或者纳米流式细胞术检测特定外泌体生物标志物，如CD63、CD81和CD9等，可以评估外泌体的纯度。

新鲜植物组织（如根、茎、叶）含有活跃的细胞代谢活动，相对来说更容易提取外泌体，外泌体得率也更高。炮制过程（如干燥、炒制、蒸煮）可能破坏细胞结构，导致外泌体降解或释放到环境中，但是炮制后的饮片依然可以成功提取外泌体，我司已经成功的从中药饮片中提取了外泌体。

正常情况下，还是建议将外泌体低温保存，常温下，可能会导致外泌体聚集，形成大颗粒沉淀，影响均一性。长期放置在室温下，外泌体容易滋生细菌或真菌，也可能会导致膜脂质氧化或水解，破坏膜完整性，内容物发生降解。

冻干外泌体可能因冰晶形成导致膜塌陷或破裂，复溶后粒径增大或聚集，标志蛋白部分丢失或变性。在电镜下观察可能会显示囊泡变形、碎片化或聚集。相比来说，新鲜外泌体完整性更高，功能活性更强，酶活性及信号蛋白功能保留完整，脂质双层结构稳定，生物膜功能正常。