项目介绍 Project introduction

 *凝胶迁移或电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)是一种研究蛋白质和DNA序列相互结合的技术，可用于定性或定量分析。

原理简介 Principle introduction

 *蛋白质可以与生物素标记的核酸探针结合，电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的速度慢，即表现为相对滞后。




 目的蛋白与生物素标记的DNA探针结合，电泳时蛋白-DNA复合物比无蛋白结合的DNA探针在凝胶中泳动的速度慢，显影出现相对滞后条带。


EMSA类型 EMSA type

 01 验证型EMSA

用于验证探针是否含有可与蛋白质结合的位点。将结合位点突变，以突变探针为对照，野生型探针出现迁移条带，而突变探针未出现迁移条带，则说明该探针含有可与蛋白质结合的位点。

 02 竞争型EMSA
探针序列不变，不含修饰基团的探针称为冷探针。冷探针与标记探针竞争性地与蛋白结合，冷探针不显影出迁移条带。以冷探针为对照，标记探针出现迁移条带，而冷探针迁移条带减弱或消失，则排除了假阳性干扰，增加实验结果准确性。

 03 超迁移EMSA

使用目标蛋白的特异性抗体，蛋白-探针复合物被抗体识别并结合，该三聚复合物在凝胶电泳中，迁移速率再次增大，出现在蛋白-探针复合物的上方的超迁移条带，验证了探针与目的蛋白的特异性结合。



注意要点 General condensed summary

▶亦可用于研究RNA结合蛋白和其相关RNA序列的相互作用。
▶ 如需要做超迁移，需提供IP级别的抗体。
▶ EMSA与酵母单杂交，可共同验证同一个问题。

 
项目流程 Project process  




报价与周期 Quotation and work cycle

◎提取总蛋白


◎蛋白表达与纯化




文献分享 Research sharing

01
Nuclear factor kappa B/p65 plays a positive role in peroxisome proliferator-activatedreceptor δ expression in orange-spotted grouper , Epinephelus coioides.
期刊： Fish and Shellfish Immunology IF：3.298 发表时间：2020



Binding reactions of Ecp65 and EcPPARδ promoter. Biotin-labelled EMSA probes are incubated with lysates of HEK293T cells including Ecp65 protein. WT, wild-type probe; MT, mutated probe. Positive control indicates EcPPARδ +Protein, negative control indicates EcPPARδ-WT.
文章中EMSA实验由本公司提供相关服务。

02
Functional Analysis of IRF1 Reveals its Role in the Activation of the Type I IFN Pathway in Golden Pompano, Trachinotus ovatus (Linnaeus 1758).
期刊：Int J Mol Sci. IF：4.183 发表时间：2020



Binding reactions of IRF1 and ToIFNa3 prompter. Biotin-labeled EMSA probes were incubated with lysates of HEK293T cells containing ToIRF1 protein.WT,wild-type probe;MT:mutated probe.1,negative control;2,positive control;3,plus ToIFNa3-P2-WT5;4,ToIFNa3-P2-WT5 plus ToIRF1-Flag;5,plus ToIFNa3-P2-MT5;6,ToIFNa3-P2-MT5 plusToIRF1-Flag.
文章中EMSA实验由本公司提供相关服务。