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知无不“研” | 单多抗怎么选？
人阅读 发布时间：2020-09-22 14:24
多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）：用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺激机体多个B细胞克隆，产生针对多种抗原表位的不同抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物，即多克隆抗体。
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。
如果对抗体的特异性要求高，用量较大或需要长期使用一致的抗体，制备的抗体应用要求多（WB/IP/IF/ICC等)，可以选择制备单克隆抗体。
多克隆抗体的特异性较差，即使是使用相同的抗原制备多抗，不同批次间也会存在差异，因而在特异性、一致性方面有很大的局限。所以在用多抗做免疫检测时，更容易造成背景，例如在WB 中有杂带，在IHC 中背景较深等等。虽然还存在着交叉反应的问题，但由于多抗识别多个抗原表位，即使是有少数几个抗原表位被破坏或者抗原构象改变，实验的结果也不会受到影响。另外多抗需要免疫原的量大，如果免疫原制备困难，建议制备单抗。
若对抗体的特异性要求不高，需要做沉淀和凝集反应的检测性实验或者只需做ELISA检测，可以选择制备多克隆抗体。
多抗相比较单抗仍然有制备时间短、首次制备成本低的特点，在一些情况下也是一种选择。另外，在相同条件下，使用多抗可以提高检测的灵敏度，对于丰度偏低的蛋白也更容易检出。的选择
抗原的选择可以是天然蛋白、重组可溶蛋白、重组变性蛋白和多肽，抗原质量越高，最终制备高质量抗体的几率也会越大！目前抗体制备常采用重组蛋白或多肽作为抗原。
常规情况下，重组蛋白作为抗原往往含有更多的抗原决定簇，既有空间表位，也会有线形序列表位，对于机体的免疫刺激也会相对充分一些，那么最终获取应用面较广的抗体几率也会大很多，尤其是目的蛋白已证明有修饰或者复杂结构的，一般都会优先选择重组蛋白。
当然也有必须用多肽制备的，比如对同源家族某一个蛋白抗体的制备，同源性非常高的，需要找到特异性aa合成多肽，再或者一些修饰化抗体，需要在多肽合成阶段定点修饰某些AA来制备抗体。抗原多肽选择一般遵循如下基本原则1.尽可能是在蛋白表面；2.保证该段序列不形成α-helix；3.N，C端的肽段比中间的肽段更好；4.避免蛋白内部重复或接近重复段的序列；5.避免同源性太强的肽段；6.交联可以交联在N，C两端，选择依据就是交联在对产生抗体不太重要的一端；7.序列中不能有太多的Pro，但有一两个Pro有好处，可以使肽链结构相对稳定一些，对产生特异性抗体有益。
案例一（MRJP1单抗制备）
In-depth Proteome ofthe Hypopharyngeal Glands of Honeybee Workers Reveals Highly Activated Protein and Energy Metabolism in Priming the Secretion ofRoyal Jelly.
案例二（制备CHIL-4和ChIFN-4的单抗）
Multiplex immunoassay of chicken cytokines via highly-sensitive chemiluminescent imaging array，Analytica Chimica Acta.
案例三（ZmREM1.3抗体）
Comparative proteomics combined with analyses of transgenic plants reveal ZmREM1.3 mediates maize resistance to southern corn rust. Plant Biotechnology Journal.
金开瑞抗体定制平台，由多位应用设计专家和工程设计专家合力打造而成，所有技术人员均拥有多年抗原设计，制备单/多克隆抗体的工业过程开发及生产经验。平台建立以来，已成功为客户制备了多种高质量抗体，其中部分达到临床应用质量标准。
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。
★单多抗优缺点★
★单抗or多抗的选择★
★单抗or多抗的选择★
如果对抗体的特异性要求高，用量较大或需要长期使用一致的抗体，制备的抗体应用要求多（WB/IP/IF/ICC等)，可以选择制备单克隆抗体。
多克隆抗体的特异性较差，即使是使用相同的抗原制备多抗，不同批次间也会存在差异，因而在特异性、一致性方面有很大的局限。所以在用多抗做免疫检测时，更容易造成背景，例如在WB 中有杂带，在IHC 中背景较深等等。虽然还存在着交叉反应的问题，但由于多抗识别多个抗原表位，即使是有少数几个抗原表位被破坏或者抗原构象改变，实验的结果也不会受到影响。另外多抗需要免疫原的量大，如果免疫原制备困难，建议制备单抗。
若对抗体的特异性要求不高，需要做沉淀和凝集反应的检测性实验或者只需做ELISA检测，可以选择制备多克隆抗体。
多抗相比较单抗仍然有制备时间短、首次制备成本低的特点，在一些情况下也是一种选择。另外，在相同条件下，使用多抗可以提高检测的灵敏度，对于丰度偏低的蛋白也更容易检出。的选择
★抗原的选择★
抗原的选择可以是天然蛋白、重组可溶蛋白、重组变性蛋白和多肽，抗原质量越高，最终制备高质量抗体的几率也会越大！目前抗体制备常采用重组蛋白或多肽作为抗原。
常规情况下，重组蛋白作为抗原往往含有更多的抗原决定簇，既有空间表位，也会有线形序列表位，对于机体的免疫刺激也会相对充分一些，那么最终获取应用面较广的抗体几率也会大很多，尤其是目的蛋白已证明有修饰或者复杂结构的，一般都会优先选择重组蛋白。
当然也有必须用多肽制备的，比如对同源家族某一个蛋白抗体的制备，同源性非常高的，需要找到特异性aa合成多肽，再或者一些修饰化抗体，需要在多肽合成阶段定点修饰某些AA来制备抗体。抗原多肽选择一般遵循如下基本原则1.尽可能是在蛋白表面；2.保证该段序列不形成α-helix；3.N，C端的肽段比中间的肽段更好；4.避免蛋白内部重复或接近重复段的序列；5.避免同源性太强的肽段；6.交联可以交联在N，C两端，选择依据就是交联在对产生抗体不太重要的一端；7.序列中不能有太多的Pro，但有一两个Pro有好处，可以使肽链结构相对稳定一些，对产生特异性抗体有益。
抗体制备合作案例
案例一（MRJP1单抗制备）
In-depth Proteome ofthe Hypopharyngeal Glands of Honeybee Workers Reveals Highly Activated Protein and Energy Metabolism in Priming the Secretion ofRoyal Jelly.
Polyclonal rabbitantibodies against 60S ribosomal proteins RpL28, RpL26, and 40Sribosomal protein S4 (RpS4), and the monoclonal mouse antibodyagainst major royal jelly protein 1 (MRJP1) were developed(Genecreate Biological Engineering, Wuhan, China).
案例二（制备CHIL-4和ChIFN-4的单抗）
Multiplex immunoassay of chicken cytokines via highly-sensitive chemiluminescent imaging array，Analytica Chimica Acta.
For the firstincubation, the surface capture of the cytokines by their respectiveprimary antibodies anti-ChIL-4 and anti-ChIFN-γ, the subsequent CLintensity value increased with increasing incubation time up to amaximum at 30 min (Fig.2a). For the second step, formation of thesandwich via the attachment of the Ab2-AuNP-HRP probe to the exposedAb1-cytokine-immunocomplex, the maximum CL value was similarlyreached with only a 25 min incubation (Fig.2b).
案例三（ZmREM1.3抗体）
Comparative proteomics combined with analyses of transgenic plants reveal ZmREM1.3 mediates maize resistance to southern corn rust. Plant Biotechnology Journal.
Western blot analysis of ZmREM1.3 in transgenic maize lines 227, 229, 231 and 233 as well as the corresponding non-transgenic sib lines, with b-actin as the loading control.
金开瑞抗体定制平台，由多位应用设计专家和工程设计专家合力打造而成，所有技术人员均拥有多年抗原设计，制备单/多克隆抗体的工业过程开发及生产经验。平台建立以来，已成功为客户制备了多种高质量抗体，其中部分达到临床应用质量标准。
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