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技术贴|史上最全IHC攻略,这谁顶得住?

发布时间:2019-10-30 13:53 |  点击次数:

金开瑞定制抗体的IHC验证图

        金开瑞专注于抗体定制多年,一站式的抗体服务、多样性的宿主系统、规模化的生产、严格的质控标准,使得金开瑞的定制抗体稳定可靠,满足客户的应用需求,深受国内外客户的欢迎。
        一张漂亮的IHC图是怎么诞生的?实验过程中我们应该注意些什么呢?
        话不多说,直接上干货,现在小编就跟大家分享IHC 实验中可能出现的各种问题及应对策略,希望给科研君的实验带来实实在在的帮助~
问题 原因 解决方案
边缘效应 组织边缘贴附不牢,边缘组织松脱漂浮于液体中 APES/多聚赖氨酸处理玻片;组织切片尽量薄;尽量避免选用坏死较多的组织
试剂未充分覆盖组织 滴加试剂时让试剂完全覆盖组织
非特异性染色 抗体质量问题 使用质量有保证的抗体
抗体孵育时间长 减少孵育时间
抗体浓度过高 降低抗体浓度
一抗为多抗 使用单克隆抗体
内源性过氧化物酶及生物素 延长灭活时间
封闭不足 延长封闭时间
DAB孵育时间过久或浓度过高 按说明书配置试剂,镜下控制反应时间
抗体孵育后洗涤不充分 每次孵育之后洗3*5次
实验过程干片 及时滴加试剂
阴性结果 抗体浓度及质量 选择有质量保证的抗体,先做预实验摸索抗体使用浓度
抗原修复不足 摸索合适的抗原修复方式及修复时间
封闭时间过长 减少封闭时间
DAB孵育时间短 镜下控制显色时间
细胞通透不全,抗体未能进入细胞反应 选择合适的通透剂及其反应时间
一抗二抗不匹配 选择正确来源的二抗
脱片 玻片未处理好 玻片清洗干净后用APES或多聚赖氨酸处理
切片厚薄不均匀 更换刀片;调整好切片机状态
烤片时间或温度不够 60℃ 2小时
组织自身问题 肿瘤坏死组织及骨组织本身易脱片
抗原修复时温度迅速变化 抗原修复后让其自然冷却
染色弱 抗体浓度低,孵育时间短 提高抗体浓度,延长反应时间
试剂使用超过有效期 试剂定时更新
滴加试剂时残余缓冲液过多使试剂稀释 滴加试剂前尽量减少残余液体
封闭过度 减少封闭时间
着色不均匀 切片厚度不一致 更换刀片;调整好切片机状态
剂配制未混匀使局部浓度不一致 试剂充分混匀后滴加
试剂未完全覆盖组织 滴加试剂时让试剂完全覆盖组织
脱蜡不完全 更换脱蜡剂或延长脱蜡时间
 金开瑞-功能蛋白质组学一站式服务商:
       武汉金开瑞生物工程有限公司位于武汉国家生物产业基地,是一家专业致力于为全球制药企业、诊断试剂企业、科研试剂研发企业、高校和科研院所以及大型医院提供蛋白及相关研究技术服务的高新技术企业。六大核心技术平台、专业技术团队,最大程度保证您的项目按时保质的实施。
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