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公司新闻

一个高质量的ELISA试剂盒是如何诞生的

发布时间:2019-09-23 11:55 |  点击次数:

    传说中,一个高质量的ELISA试剂盒,在准确度、精密度、灵敏度、特异性、稳定性等方面都有着异于常盒的表现。
    那么,一个高质量的ELISA试剂盒,究竟是如何诞生的呢?
    下面,就跟随我们的一个真实案例,一起去看看吧~~




    试剂盒开发之前,经过与客户的具体沟通,我们了解到客户的实际需求,
并制定了以下开发流程:
    基因合成及载体构建——重组蛋白制备——动物免疫——抗体对筛选——ELISA试剂盒开发
下面,就让我们来具体看看吧:
1、重组蛋白制备
    我们先针对目标蛋白的表达难度、抗原表位、结构域及同源性做了全面且细致的分析评估,确定了抗原的表达区间,然后采用大肠表达系统,制备出了纯度不低于90%的重组蛋白用于免疫。
2、动物免疫
     我们采取2种方案,免疫8只BalB/C小鼠,效价如下:
3、抗体筛选
     抗体筛选阶段,我们首先采用高通量融合筛选方式,将內源样本的检测及表位分组提前在亚克隆阶段,大大提高了抗体制备的成功率和筛选的主动性。
在经过亚克隆阶段验证和抗体纯化后,我们最终得到的抗体效价如下:
4、ELISA试剂盒开发
     为了保证所开发的ELISA试剂盒的质量,我们对最后到达质控平台的抗体原料做了检测限标曲调试,并从热稳定性以及同类指标的交叉反应等方面验证了抗体批内批间的变异系数,对抗体对的性能做了全面的评估。
此后,我们建立了ELISA检测方法,确定了标准曲线及线性范围,并提供ELISA基本参数进行评价,建立了样品检测及评价方法。
  • 标曲确定
  • 测样初定量
  • 冻干验证及测样
  • 热稳定性测试
  • 样本线性测试
  • LOD及批内批间测试

     最终开发出的试剂盒检测范围为0.03125 ng/mL-2 ng/mL,灵敏度为10.242 pg/mL,批内差CV%<8%,批间差CV%<10%,且在特异性方面只识别目标蛋白,与其他相关蛋白无交叉反应。

(文中所有数据图片均经客户同意后公开)
    至此,一个ELISA试剂盒就诞生了
    总结一下,ELISA试剂盒的质量取决于其原料,也就是抗体对的质量
    抗体对的质量体现在它的灵敏度、稳定性和交叉反应
    我们在抗原设计和抗体筛选阶段,就将其应用考虑进去,提高抗体制备的成功率,也大大保证了抗体对的质量。
    金开瑞拥有基因合成平台蛋白表达平台抗体制备平台,并具备多年的试剂盒开发经验。提供从基因合成、抗原制备、抗体制备到ELISA试剂盒生产的一站式服务,带给您qian所wei有的便利。
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